聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）是一种广泛应用于生物化学和分子生物学领域的分离技术。通过调节聚丙烯酰胺的浓度和交联度，可以实现对不同大小的核酸或蛋白质分子的有效分离。本文将详细介绍一种常用的聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶配方及其制备方法。

一、所需试剂与材料

1. 丙烯酰胺（Acrylamide）

- 浓度：30%（w/v）

- 注意事项：有毒性，操作时需佩戴手套并确保通风良好。

2. 亚甲基双丙烯酰胺（Bis-acrylamide）

- 浓度：2%（w/v）

- 作用：作为交联剂，用于形成三维网络结构。

3. Tris-HCl 缓冲液

- pH 值：8.8（上层胶）/6.8（下层胶）

- 浓度：1.5 M 或根据实验需求调整。

4. 过硫酸铵（APS）

- 浓度：10%（w/v）

- 作用：引发聚合反应。

5. 四甲基乙二胺（TEMED）

- 作用：加速聚合反应。

6. 去离子水

7. 玻璃板和梳子

- 用于制备电泳槽中的凝胶模具。

二、凝胶配方设计

1. 上层胶（分离胶）

- 丙烯酰胺：4 mL（12% w/v）

- 亚甲基双丙烯酰胺：0.67 mL（4% w/v）

- Tris-HCl 缓冲液：6.2 mL（pH 8.8）

- 去离子水：3.3 mL

- 过硫酸铵：0.1 mL（10% w/v）

- TEMED：0.004 mL

2. 下层胶（浓缩胶）

- 丙烯酰胺：1.5 mL（5% w/v）

- 亚甲基双丙烯酰胺：0.083 mL（0.4% w/v）

- Tris-HCl 缓冲液：2.5 mL（pH 6.8）

- 去离子水：2.4 mL

- 过硫酸铵：0.05 mL（10% w/v）

- TEMED：0.002 mL

三、制备步骤

1. 配制分离胶溶液

按照上述配方准确称量各试剂，并依次加入到烧杯中，搅拌均匀直至完全溶解。随后将混合液倒入玻璃板模具中，插入梳子以形成加样孔。

2. 聚合反应

在分离胶表面覆盖一层无水乙醇或正丁醇，以隔绝氧气。静置约30分钟，待其自然聚合固化。

3. 配制浓缩胶溶液

清洗模具后，按照浓缩胶配方重新配制溶液，并缓慢覆盖在已固化的分离胶上方。

4. 插入梳子

再次插入梳子，确保加样孔位置正确且平整。

5. 聚合反应

同样静置30分钟左右，使浓缩胶完全固化。

6. 电泳准备

加入缓冲液至模具中，确保凝胶完全浸没。连接电源并按照设定参数进行电泳。

四、注意事项

1. 所有试剂均需现配现用，避免长时间存放导致失效。

2. 操作过程中务必小心谨慎，避免交叉污染。

3. 根据目标分子的大小范围选择合适的凝胶浓度。

4. 电泳结束后及时取出样品，防止过度加热影响结果。

通过以上配方及步骤，您可以成功制备出高质量的聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶，为后续实验提供可靠的数据支持。